| Tartu Tervishoiu Kõrgkool Bioanalüütika labori kvaliteedikäsiraamat | |||
| Koostas: | Aivar Uus | Kuupäev: | 01.09.2012 |
| Kinnitas: | Anneli Raave-Sepp | Kuupäev: | 01.09.2012 |
1.2.1. MEETODI ULATUS
- Käesolev juhend on mõeldud vereäige värvimiseks Tartu Tervishoiu Kõrgkooli hematoloogia õppelaboris.
- Tegemist on Leishman-Giemsa värvingu õppelabori tarbeks optimeeritud protokolliga.
- Vereäige preparaat võimaldab hinnata vererakke mikroskoobis ja on lisauuring hemogrammile.
- Vereäige hindamisel antakse kompleksne hinnang kõigile vererakkudele: leukotsüütidele, erütrotsüütidele, trombotsüütidele.
1.2.2. MEETODI KEHTIVUS
- Meetod kehtib kasutamiseks õppetöös: JAH
- Meetod kehtib kasutamiseks teadusuuringute teostamisel: JAH
- Meetod kehtib kliiniliseks kasutamiseks patsiendi proovide teostamisel: EI
1.2.3. MEETODI PÕHIMÕTE
- Värvimise tulemuseks on vererakkude värvumine tsütokeemiliste omaduste järgi.
- Erinevad vereraku komponendid värvuvad erinevate värvidega.
- Värvimiseks kasutatakse kombinatsiooni kahest värvist:
- Esimene värv on Leishmani värv, rakkudele mõjuvad värvid on eosiin ja aluseline metüleensinine. Värvid sisaldavad fiksaatorina metanooli.
- Teine värv on Giemsa värv, rakkudele mõjub asuurvärv.
- Värvimismetoodika tuleb laboripõhiselt kohandada.
1.2.4. VÄRVINGU TEOSTAMISEKS VAJALIKUD TÖÖVAHENDID
Õppelaboris on vajalikud töövahendid valmis pandud metallkandikule (Joonis 1).
- Kolm värvivanni koos kelguga
- Taimerkell
- Paberkäterätikud
- Klaaspipett koos kummiballooniga
- Mõõtsilinder
- Leishmani värv:
- 500 ml pudelis
- Värvilahus on valmis kasutamiseks
- Hoitakse toatemperatuuril ja säilib pudelil märgitud realiseerimisajani
- Kasutusel olevat lahust võib kasutada 7 päeva
- Giemsa värv
- 2.5 l kanistris
- Kontsentreeritud värvilahus, millest tuleb valmistada töölahus (vt p 6.0)
- Hoitakse toatemperatuuril ja säilib kanistril märgitud realiseerimisajani
- Töölahus on kasutuskälblik üks tööpäev
- Destilleeritud vesi
- Vereäiged
1.2.5. TÖÖOHUTUS JA JÄÄTMEKÄITLUS
- Uuringus kasutatavaid proovimaterjale tuleb käidelda potensiaalselt nakkusohtliku materjalina. Kasutada tuleb isikukaitsevahendeid.
- Uuringu käigus tekkinud bioloogiliselt ohtlikud jäätmed kogutakse selleks spetsiaalselt ettenähtud jäätmenõudesse.
- Kasutatavaid värve tuleb käidelda vastavalt kemikaalide käitlemise juhistele.
- NB! Ole värvidega ettevaatlik! Kanna kindlasti kindaid ja kitlit! Värve ei ole lubatud pipeteerida automaatpipetiga. Värvine pipett loputa pärast kasutamist ja toeta see kuivama salvräti kohale! Värske värvi saab veel desinfitseeriva vahendiga maha pesta. Värv on „kuum laava“!
- Hoia vannidel õiged klaaskaaned peal!
1.2.6. TÖÖKÄIK
- Sildista värvivannid ja nende kaaned: kirjuta sildile vannis oleva lahuse nimi ja vanni täitmise kuupäev:
- Esimene vann – Leishmani värv
- Teine vann – kraanivesi
- Kolmas vann – Giemsa töölahus
- Täida vannid õigete lahustega:
- NB! Pane värve/vett vanni piisavalt, et preparaadid oleksid täielikult kaetud!
- Leishmani värv on kasutamiseks valmis
- Kasuta kraaniveena õppelabori kraanist käesooja vett
- Valmista Giemsa kontsentreeritud värvilahusest töölahus otse värvivanni:
- Lahjenda Giemsa värvi destilleeritud veega vahekorras 1:10. Piisava töölahuse saamiseks mõõda mõõtsilindriga 180 ml destilleeritud vett ja lisa klaaspipetiga 20 ml kontsentreeritud Giemsa värvi
- Kontrolli üle, et preparaadid oleksid markeeritud hariliku pliiatsiga
- Aseta kuivanud preparaadid kelgule ühte pidi. Kui on vaja värvida korraga üle 10 preparaadi, võib kaks preparaati panna kelgu ühte vahesse nii, et tagumised (so ilma vereta) pooled on vastamisi
- Alusta värvimisega ühe kuni nelja tunni jooksul pärast preparaatide kuivamist.
- Värvimise käik:
- Hoia preparaatidega kelku 8 minutit Leishmani värviga vannis
- Nõruta paberkäterätikul. Võid ka kelgu servi kergelt kuivatada. NB! Oluline on, et ühest vannist teise tuleks võimalikult vähe vedelikku kaasa!
- Loputa kelku kraaniveega vannis 20 sekundi vältel nõrgalt üles-alla liigutades
- Nõruta taas paberkäterätikul
- Hoia kelku 18 minutit Giemsa värviga vannis
- Loputa jooksva kraanivee all kuni oled kindel, et oled kõik preparaadid mõlemalt poolt loputanud ja loputusvees ei ole näha värvi. Ära karda vett survega lasta!
- Tõsta preparaadid ettevaatlikult kuivama kaldnurga all seljaga vastu tuge nii, et vereäige saba (äige lõpuosa) jääb ülespoole. Ära materjali maha tõmba!
1.2.7. VÄRVINGU KVALITEEDI HINDAMINE
- Äige värvimine on õnnestunud, kui:
- Preparaadi värvus on punakas violetne
- Äige fooni moodustavad erütrotsüüdid on värvunud hallikas roosaks
- Preparaadis ei esine värvisadet
- Leukotsüütide struktuurid on iseloomulikult värvunud (Tabel 1)
| Segmenttuumne neutrofiil | |
 | Tuum on värvunud violetselt, kromatiin on jämedateraline ja kämpunud. Tsütoplasma on heleroosa. Graanulid on rohkearvulised, peeneteralised, roosakas-lillad. |
| Eosinofiil | |
 | Tuum on roosakas-violetne, heledam kui neutrofiili tuum. Tsütoplasma on heleroosa ja rohke granulatsiooni tõttu halvasti nähtav. Spetsiifilised graanulid on oranžikas-roosad (nn porgandi või punase kalamarja värvi), võrreldes neutrofiili graanulitega jämedateralisemad. |
| Basofiil | |
 | Tuum on violetne, raskesti eristatav tsütoplasmaatiliste graanulite tõttu. Tsütoplasma on kerge roosaka varjundiga. Graanulid on suured, erineva kuju ja suurusega sügav-violetsed kuni mustjad, korrapäratu paigutusega ja katavad tuuma. Basofiili võib ümbritseda roosakas „halo“. |
| Lümfotsüüt | |
 | Tuum on violetne, tihedalt värvunud. Tsütoplasma on helesinine. Tsütoplasmas võib esineda õrn asurofiilne sõmerus. |
| Monotsüüt | |
 | Tuum on violetne, hõre. Tsütoplasma suitsjas-hall. Tsütoplasmas võib esineda „azurofiilset tolmu“, vakuoole. |
Tabel 1. Erinevatele leukotsüütidele iseloomulik värvumus
1.2.8. TÖÖ LÕPETAMINE
- Töö lõpetades korrasta ja desinfitseeri oma töökoht
- Tühjenda ja loputa värvivannid, kelgud
- Kuivanud vereäigeid säilita vastavatel alustel või karpides
