1.11. ERÜTROTSÜTAARSETE ANTIKEHADE SÕELUURING ID-DiaClon GEELTEHNIKAL

Tartu Tervishoiu Kõrgkool Bioanalüütika labori kvaliteedikäsiraamat
Koostas:	Anneli Karus	Kuupäev:	05.01.2015
Kinnitas:	Anneli Raave-Sepp	Kuupäev:	05.01.2015

1.11.1. MEETODI ULATUS

Käesolev juhend on mõeldud erütrotsütaarsete antikehade olemasolu määramiseks Tartu Tervishoiu Kõrgkooli hematoloogia õppelaboris.
Juhendi koostamisel on lähtutud ID-DiaClon LISS/Coombs geelkaardi infolehest ning immuunhematoloogilisi uuringuid reguleerivatest õigusaktidest.

Test põhineb reaktsioonil polüspetsiifilise anti-humaan globuliini reagendiga (AHG), mille peamine funktsioon on IgG tüüpi antikehade avastamine patsiendi plasmas või seerumis.
Reaktsioon võib toimuda ka C3-ga või IgA ja IgM tüüpi antikehadega.
Erütrotsütaarsete antikehade skriining tuleb teostada: rasedatel; patsiendile, kellele planeeritakse teha transfusioonravi (vereülekanne jne).

Analüüsiks võtta veeniveri EDTA katsutisse (lilla kork) või CPD-A katsutisse (geelita seerumikatsuti). NB! Geeliga seerumikatsuti analüüsi teostamiseks ei sobi!
Kui patsiendilt ei saa võtta veeniverd, tehakse analüüsid kapillaarverest.
Proovimaterjal ei tohi olla hemolüütiline.
Analüüsi teostamiseks kasutada võimalikult värsket verd. Vajadusel saab verd säilitada külmkapi temperatuuril (+2 kuni +8 ̊C) kuni kaks (2) ööpäeva.

Geelkaart ID-Card: LISS/Coombs.
- Säilitatakse püstises asendis toatemperatuuril (+18 kuni +25 ̊C).
- Säilivusaeg on märgitud tootele.
- Säilivuse tagamiseks peavad kaardid olema õhutihedalt fooliumribaga kaetud.
Skriiningerütrotsüüdid ID-DiaCell I ja II (Joonis 2).
- Säilitatakse külmkapi temperatuuril (+2 kuni +8 ̊C).
- Analüüside teostamiseks võetakse eelnevalt soojenema toatemperatuurile.
- Säilivusaeg on märgitud tootele.

Uuringus kasutatavaid proovimaterjale tuleb käidelda potensiaalselt nakkusohtliku materjalina. Kasutada tuleb isikukaitsevahendeid.
Uuringu käigus tekkinud bioloogiliselt ohtlikud jäätmed kogutakse selleks spetsiaalselt ettenähtud prügikasti.
Kasutatavaid reagente tuleb käidelda vastavalt kemikaalide käitlemise juhistele.

Võta külmkapist välja uuringu teostamiseks vajalikud skriiningerütrotsüüdid ID-DiaCell I ja II (Joonisel 2) ja lase neil soojeneda toatemperatuurini.

Tsentrifuugi patsiendi verekatsuti 10 minutit RCF 2000g juures.
Lülita sisse ID-incubator (Joonis 1), et see oleks vajalikuks hetkeks (punkt 8.2.6.) saavutanud õige temperatuuri.
Pane statiivile valmis geelkaart ID-Card: LISS/Coombs (Joonis 3). Ühe kaardiga saab skriinida 3 patsienti: ühe patsiendi jaoks kulub 2 küvetti.
Jaga kaart markeriga kolmeks osaks. Hoia kaarti püstiasendis!
Markeeri kaart patsiendi andmetega (nimi, kood vmt) ja analüüsi teostamise kuupäevaga ning skriiningerütrotsüütide märgistuseks esimesele küvetile I ja teisele küvetile II.

Kontrolli skriiningerütrotsüütide säilivusaega ja lahuse värvust ning sega pudeleid ettevaatlikult aga hoolikalt, et skriiningerütrotsüüdid seguneksid säilituslahusega. NB! Jälgi, et pudeli põhjas ei oleks sadet!
Pane patsiendi tsentrifuugitud verekatsuti statiivile. Analüüsiks on vaja plasmat või seerumit ilma geelita katsutist.

Kontrolli, kas geelkaart (ID-Card: LISS/Coombs) on vastavalt patsiendile markeeritud (patsiendi andmed, kuupäev ning küvettidele numbrid I ja II, vaata Joonis 3).
Ühe patsiendi kohta kulub 2 küvetti! Eemalda kaardilt (küvettide pealt) ettevaatlikult fooliumriba vaid nende küvettide ulatuses, mida hakkad kohe kasutama.
Kolme patsiendi korral eemalda fooliumriba nii, et viimane ots jääks kaardiga seotuks.
Sega skriiningerütrotsüütide pudeleid ja jälgi, et pudeli põhjas ei oleks sadet! Pipeteeri vasakult paremale lugedes (Joonis 4 ja 5) kaardi esimesse küvetti 50 μl skriiningerütrotsüüte pudelist ID-DiaCell I ja teise küvetti 50 μl skriiningerütrotsüüte pudelist ID-DiaCell II.
Lisa mõlemasse küvetti 25 μl patsiendi plasmat/seerumit.
NB! Pipeteeri lahused vastu küveti seina (Joonis 4)

Kata küvetid fooliumribaga ja pane geelkaart inkubeerima 15 minutiks ID-inkubaatorisse (37 ̊C ± 1 ̊C). Käivita inkubaator vajutades START nuppu.
Tsentrifuugi kaart.

Aseta geelkaart ID-tsentrifuugi (Joonis 5) kaardihoidjasse nii, et oleks tagatud tasakaal (vajadusel kasuta tasakaalustamiseks tühja geelkaarti). Soovitatav on paigutada kaart nii, et fooliumriba avatav ots jääb väljapoole. See väldib tsentrifuugimisel kaardi takerdumist, kui kaart pöördub 90-kraadise nurga alla.
Sulge tsentrifuugi kaas ja vajuta START nuppu, et käivitada tsentrifuugimistsükkel (10 minutit, pöörete arv 1175).
Ebaühtlase kaartide jaotamise korral lülitab tsentrifuug end 5-10 sek jooksul välja ja süttib ALARM tuli. Sellisel juhul ava kaas ja paiguta kaardid tasakaalu.
Katkestusteta kulgenud tsentrifuugimistsükli (10 minutit) lõppedes avaneb tsentrifuugikaas automaatselt.
Võta ID-kaart tsentrifuugist välja statiivile ja hinda tulemusi.

Peale tsentrifuugimist on näha küvetis oleva geeli pinnal, geeli sees või põhjas erütrotsüütidest moodustunud punane kriips. Vastavalt sellele saab otsustada, kas tulemus on positiivne või negatiivne (Joonis 6).
Küveti tulemus on (++++) positiivne kui kriips asub geeli peal. Samuti loetakse proov positiivseks kui geeli sees on märgata hägu või terakesi (+++), (++) või (+) vääriliselt. Tulemus on (-) negatiivne, kui kriips asub täielikult küveti põhjas.

Erütrotsütaarsed antikehad I: Positiivne või negatiivne
Erütrotsütaarsed antikehad II: Positiivne või negatiivne
Kui kumbki antikehadest osutub positiivseks, siis on vaja antikehad tüpiseerida (ja proovimaterjal tuleb saata Verekeskusesse).

Töö lõpetades korrasta ja desinfitseeri oma töökoht, ID-inkubaator ja ID-tsentrifuug.
Lülita ID-inkubaator ja ID-tsentrifuug vooluvõrgust välja.
Pane skriiningerütrotsüüdid külmikusse.